旗下实验室荣誉资质
CMA资质认定证书
CNAS认可证书
技术概述
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测（Acyl-Resin-Assisted Capture，简称Acyl-RAC）是一种基于化学捕获原理建立的蛋白质S-棕榈酰化检测技术。蛋白质棕榈酰化是指棕榈酸等长链饱和脂肪酸通过硫酯键共价连接到目的蛋白特定半胱氨酸残基上的一种可逆性翻译后修饰，广泛存在于真核细胞中，在调控蛋白质膜定位、转运、稳定性、蛋白质相互作用以及信号转导等过程中发挥着关键作用。由于棕榈酰化异常与神经系统疾病、肿瘤、代谢性疾病及病毒感染等多种病理过程密切相关，建立精准、高效的棕榈酰化检测体系具有重要意义。
酰基树脂辅助捕获技术的核心原理在于利用棕榈酰化修饰中硫酯键对羟胺（NH2OH）敏感这一化学特性。实验首先利用甲基甲硫代磺酸盐（MMTS）等巯基封闭试剂封闭样品中所有游离的半胱氨酸巯基，随后使用羟胺特异性切割棕榈酰化的硫酯键，重新释放出游离子半胱氨酸上的巯基，再借助含有活性二硫键的巯基反应性树脂对新生巯基进行特异性捕获，最后通过还原洗脱获得富集的棕榈酰化蛋白组分，结合免疫印迹或质谱技术进行定性定量分析。
与代谢标记法相比，酰基树脂辅助捕获技术无需在活细胞中掺入炔基棕榈酸类似物，可直接利用组织、细胞及临床样本开展检测，具有适用样品类型广泛、操作流程相对简便、与下游质谱分析兼容性好等突出优势，是目前棕榈酰化研究与规模化棕榈酰化蛋白质组学分析的主流技术手段之一。
检测样品
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测对样品类型具有较好的兼容性，常见的检测样品包括：
- 哺乳动物培养细胞样品，如HEK293、HeLa、神经元细胞等贴壁或悬浮细胞；
- 动物组织样品，如脑组织、心脏、肝脏、脾脏、脂肪组织等；
- 临床来源样品，如手术切除的肿瘤组织及配对癌旁组织；
- 植物组织样品，用于植物蛋白质棕榈酰化研究；
- 微生物样品，包括细菌、真菌及寄生虫来源的蛋白提取物；
- 外泌体、细胞膜组分等亚细胞结构样品；
- 体外表达并纯化的重组蛋白样品。
需要特别注意的是，样品制备过程中应避免引入二硫苏糖醇（DTT）、β-巯基乙醇等还原剂，因为还原剂会干扰游离巯基的封闭效率及树脂捕获反应的特异性。样品应尽量保持新鲜，无法及时处理的样品建议在液氮中速冻后于零下八十摄氏度保存，并避免反复冻融。
检测项目
依托酰基树脂辅助捕获技术平台，可开展的检测项目主要包括以下几类：
- 目标蛋白S-棕榈酰化水平的定性与半定量检测；
- 目的蛋白棕榈酰化修饰位点鉴定；
- 全细胞水平棕榈酰化蛋白质组学筛查与定量分析；
- 棕榈酰化动态变化检测，如药物刺激、基因敲除或过表达前后的修饰水平变化；
- 棕榈酰基转移酶与硫酯酶活性间接评估；
- 棕榈酰化抑制剂、调节剂的药效评价；
- 不同组织、不同发育阶段或疾病状态下棕榈酰化谱的差异比较分析。
根据研究目的的不同，可选择针对单一目标蛋白的验证型检测方案，也可选择面向修饰组学的规模化筛查方案，实验方案将结合样本背景、靶蛋白特性及数据需求进行个性化设计。
检测方法
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测的标准化流程主要包括以下步骤：
- 样品裂解与蛋白提取：使用含有巯基封闭试剂且不含还原剂的裂解体系充分裂解样品，获取总蛋白；
- 游离巯基封闭：利用MMTS对蛋白中所有非棕榈酰化的游离半胱氨酸巯基进行彻底封闭，排除后续反应的干扰；
- 硫酯键切割：加入中性羟胺溶液特异性切割棕榈酰化硫酯键，重新暴露棕榈酰化位点上的巯基；
- 树脂捕获与洗涤：将处理后的蛋白样品与巯基反应性树脂充分孵育，使新生巯基与树脂共价结合，并通过多轮洗涤去除非特异性结合的蛋白；
- 还原洗脱：利用还原条件将被捕获的棕榈酰化蛋白从树脂上洗脱下来；
- 下游检测分析：洗脱组分通过Western blot对目标蛋白进行检测，或通过液相色谱串联质谱进行大规模蛋白鉴定与位点解析；
- 数据分析：结合对照组数据，对棕榈酰化水平进行归一化处理与统计学分析。
为保证结果的可靠性，实验中会同步设置不加羟胺的阴性对照、已知棕榈酰化蛋白的阳性对照以及上样量对照，通过对照体系监控反应特异性，排除非特异性捕获造成的假阳性结果，确保检测数据的准确性与可重复性。
检测仪器
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测涉及蛋白化学处理、亲和捕获及多平台下游分析，主要使用的仪器设备包括：
- 高分辨液相色谱串联质谱系统，用于棕榈酰化蛋白鉴定与位点分析；
- 垂直电泳系统与转膜系统，用于聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹分析；
- 化学发光凝胶成像系统，用于Western blot信号的采集与定量；
- 低温高速离心机与超速离心机，用于样品分级分离与组分收集；
- 超声细胞破碎仪与组织匀浆器，用于样品的充分裂解；
- 恒温摇床与旋转孵育器，保证捕获反应的充分进行；
- 紫外分光光度计与酶标仪，用于蛋白浓度测定与定量分析；
- 蛋白纯化系统，用于重组蛋白样品的前处理；
- 超低温冰箱与液氮储存设备，保障样品与试剂的稳定性。
完善的仪器配置与规范的日常维护校准，是保障检测流程稳定运行和数据质量的重要基础。
应用领域
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测技术应用范围广泛，主要涵盖以下研究方向与产业领域：
- 神经科学研究：突触蛋白棕榈酰化与神经元兴奋性、突触可塑性及神经退行性疾病机制研究；
- 肿瘤研究：癌基因与抑癌相关蛋白的棕榈酰化调控、肿瘤增殖与转移机制探索；
- 信号转导研究：G蛋白偶联受体、小GTP酶及激酶类信号分子的膜定位调控分析；
- 病毒学与感染免疫：病毒蛋白棕榈酰化对病毒组装、出芽及感染力的影响研究；
- 代谢与心血管研究：葡萄糖转运蛋白、离子通道相关蛋白的修饰调控分析；
- 药物研发：棕榈酰化通路抑制剂筛选、药效评价及作用机制研究；
- 基础生命科学研究：蛋白质翻译后修饰网络与修饰蛋白质组学的系统性研究。
随着棕榈酰化研究热度的持续上升，该技术已成为解析脂质修饰生物学功能、发现疾病相关修饰靶点的重要支撑手段，在科研论文发表、课题研究及新药开发中均有广泛应用。
常见问题
问题一：酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测的检测周期是多久？
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测的检测周期一般为7-15个工作日。具体周期会受到多种因素影响，包括检测项目的数量与类型、样品数量、方法复杂程度以及下游分析手段等。例如，仅针对单一目标蛋白的Western blot验证型检测周期相对较短；若涉及棕榈酰化蛋白质组学的大规模质谱筛查及生物信息学分析，所需时间则会相应延长。此外，若客户有明确的时效要求，可根据实际情况安排加急处理，建议在送检前与技术人员充分沟通，确认合理的检测时间安排。
问题二：酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测的检测价格是多少？
酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测的价格受多方面因素影响，主要包括检测项目的具体类型、所选用的检测方法、样品数量、检测周期以及是否需要定制化方案等。例如，单一目标蛋白的验证性检测与全蛋白质组规模的修饰筛查，在实验工作量和资源投入上差异较大，费用也会相应不同；是否需要加急服务、重复样品数量等同样会影响整体费用。由于每个项目的需求各不相同，建议您在送检前联系我们详细说明研究背景与检测需求，我们将根据具体方案为您提供准确的报价信息。
问题三：酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测测试需要什么资质？
我们旗下拥有CMA和CNAS资质，检测能力范围覆盖蛋白质翻译后修饰分析、生物样品检测等多个领域，能够为科研院所、高校及企业提供专业可靠的检测服务。同时，我们组建了由经验丰富的技术人员构成的专业团队，长期从事蛋白质修饰检测方法开发与优化，配备了质谱分析系统、蛋白电泳及免疫印迹等完善的仪器设备平台，可保障酰基树脂辅助捕获棕榈酰化检测全流程的规范性与数据质量。您如有资质或能力范围方面的具体要求，欢迎随时与我们沟通确认。
问题四：酰基树脂辅助捕获方法与生物素交换法、代谢标记法有什么区别？
三者的核心目标都是检测蛋白质棕榈酰化，但技术路线存在明显差异。生物素交换法与酰基树脂辅助捕获方法原理相似，均依赖羟胺切割硫酯键，区别在于前者利用生物素化巯基试剂标记后通过链霉亲和素富集，后者直接采用巯基反应性树脂进行捕获，操作步骤更简化、成本更低。代谢标记法则需要在活细胞中掺入带炔基或叠氮基团的脂肪酸类似物，不适用于组织及临床样品。酰基树脂辅助捕获方法无需代谢标记，可直接处理组织样本，且与质谱兼容性好，因此在多种类型样品的检测中具有突出的适用优势。
问题五：送检样品在制备和保存上有哪些要求？
样品制备的关键在于保护巯基反应活性。首先，裂解过程中严禁使用DTT、β-巯基乙醇等还原剂，以免干扰巯基封闭与树脂捕获反应；其次，建议样品在冰上快速操作，避免蛋白降解导致的检测偏差；再次，组织样品离体后建议立即速冻保存，细胞样品可经胰酶消化或刮取后离心收集，于零下八十摄氏度保存，并尽量减少反复冻融次数。样品寄送时建议使用干冰运输，并提前与技术负责人确认送样量和包装要求，以确保样品活性与检测结果的可靠性。
问题六：酰基树脂辅助捕获检测能否鉴定具体的棕榈酰化位点？
可以的。将酰基树脂辅助捕获技术与液相色谱串联质谱联用后，可以对富集获得的棕榈酰化肽段进行序列解析，从而定位发生修饰的具体半胱氨酸位点。需要注意的是，位点鉴定依赖于质谱对修饰肽段的覆盖率，某些肽段因酶切特性或离子化效率问题可能无法被有效检出，因此建议在实验设计阶段明确研究目标：若仅验证目标蛋白是否发生棕榈酰化，可采用Western blot方案；若需明确位点信息，则建议选择与质谱联用的完整方案，必要时可对酶切条件进行优化以提高位点覆盖率。
问题七：如何保证检测结果的特异性，避免假阳性？
实验中通过完善的对照体系保障结果特异性。标准方案会设置不加羟胺处理的阴性对照，由于未经羟胺切割的样品理论上不会产生新的游离巯基，树脂上不应捕获到目的蛋白，若阴性对照出现明显信号则提示封闭不完全或存在非特异性结合，需优化封闭条件与洗涤强度；同时设置已知棕榈酰化蛋白作为阳性对照，监控反应体系的有效性；此外还会设置总蛋白上样对照，用于棕榈酰化水平的归一化处理。通过上述多重对照与严谨的流程质控，可有效降低假阳性风险，确保检测数据真实可靠。
