旗下实验室荣誉资质
CMA资质认定证书
CNAS认可证书
技术概述
蛋白质琥珀酰化是近年来发现的一种重要翻译后修饰，指在酶促或非酶促条件下，琥珀酰辅酶A分子中的琥珀酰基团被共价连接到蛋白质赖氨酸残基上的过程。由于琥珀酰基团带有两个负电荷，琥珀酰化能够显著改变蛋白质的表面电荷分布、空间构象与生物学功能，广泛参与代谢酶活性调控、线粒体功能维持、基因表达调节等多种生命活动。与乙酰化、甲基化等修饰类似，琥珀酰化也是一个可逆的动态过程，其逆向反应由去琥珀酰化酶催化完成。
去琥珀酰化酶活性检测，是指利用体外酶反应体系或细胞、组织水平的功能实验，对催化去除赖氨酸琥珀酰基团的酶蛋白的催化能力进行定性或定量分析的一类技术服务。目前已知的去琥珀酰化酶主要属于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖的sirtuin家族，其中SIRT5是最具代表性的去琥珀酰化酶，定位于线粒体，对多种代谢相关蛋白具有广泛的去琥珀酰化能力；SIRT7主要定位于细胞核，也被证实参与组蛋白等底物的去琥珀酰化调控。通过检测去琥珀酰化酶的活性水平，研究者可以评估该类酶在不同生理、病理条件下的功能状态，为代谢调控机制研究、药物筛选与疾病标志物开发提供关键数据支撑。
去琥珀酰化酶活性检测在基础研究与产业化应用中的意义主要体现在以下几个方面：一是揭示琥珀酰化修饰的动态调控规律，完善蛋白质翻译后修饰网络图谱；二是评估候选药物对去琥珀酰化酶的抑制或激活效应，支撑新药研发进程；三是比较不同组织、细胞或疾病模型中酶活性的差异，挖掘潜在的治疗靶点；四是为重组酶制品、生物试剂的质量控制提供客观的活性评价手段。
检测样品
去琥珀酰化酶活性检测对样品类型具有较好的兼容性，常见的检测样品包括但不限于以下几类：
- 重组去琥珀酰化酶蛋白（如原核或真核表达系统制备的SIRT5、SIRT7等）；
- 各类培养细胞裂解液（如HEK293、HeLa、HepG2等细胞系）；
- 哺乳动物组织匀浆（肝脏、心脏、脑、肾脏、骨骼肌等）；
- 线粒体提取物及亚细胞组分；
- 免疫沉淀或亲和纯化获得的酶蛋白复合物；
- 血清、血浆等体液样本（需视检测方法灵敏度而定）；
- 发酵液、细胞培养上清等工程样品。
为保证检测结果的准确性与重复性，样品在采集、运输与保存过程中应尽量避免反复冻融。一般建议将样品分装后置于-80℃低温保存，采用干冰冷链运输，并在送样前提供样品的蛋白浓度、缓冲液组成等基本信息，以便实验室选择最适的检测方案，最大程度保持酶活性不受损失。
检测项目
围绕去琥珀酰化酶的功能评价，可开展的检测项目内容丰富，可根据研究目的灵活组合：
- 去琥珀酰化酶总活性测定：在标准反应条件下测定单位时间内产物的生成量，计算比活性；
- 酶促反应动力学分析：测定米氏常数（Km）、最大反应速率（Vmax）及催化效率（Kcat/Km）等参数；
- 抑制剂筛选与评价：测定候选化合物对酶活性的半数抑制浓度（IC50）及抑制类型分析；
- 激活剂评价：评估小分子化合物对酶活性的增强作用及量效关系；
- 底物特异性分析：比较酶对不同琥珀酰化底物多肽的催化效率；
- 时间依赖性与剂量依赖性实验：绘制不同孵育时间、不同酶量条件下的活性曲线；
- 酶活性稳定性考察：评估温度、pH、储存条件等因素对酶活性的影响；
- 细胞或组织水平琥珀酰化水平检测：通过总蛋白琥珀酰化程度的变化间接反映去琥珀酰化酶的功能状态。
检测方法
针对不同的检测目的与样品类型，实验室通常采用以下一种或多种方法组合开展去琥珀酰化酶活性检测：
1. 荧光底物法
该方法以人工合成的琥珀酰化多肽与7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）偶联的底物为反应底物，去琥珀酰化酶催化去除赖氨酸残基上的琥珀酰基团后，偶联的胰蛋白酶可进一步剪切暴露出的肽键并释放游离的AMC荧光基团，通过检测荧光强度随时间的增加速率即可计算酶活性。该方法灵敏度高、通量大，适合大批量样品筛选与抑制剂评价，是目前应用最为广泛的方案之一。
2. 高效液相色谱法（HPLC）
以琥珀酰化多肽为底物，酶促反应终止后，利用HPLC分离底物与去琥珀酰化产物，通过紫外或荧光检测器记录峰面积变化，定量计算转化率与酶活性。该方法不依赖偶联酶反应，可避免外源酶带来的干扰，结果直观可靠。
3. 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）
质谱法可直接检测酶促反应产物中肽段的去琥珀酰化修饰状态，具有极高的特异性与灵敏度，可用于复杂底物乃至内源性蛋白样品的分析，同时能够精确定位修饰位点，是深入机制研究中的重要手段。
4. 酶联免疫吸附法（ELISA）
采用琥珀酰化赖氨酸特异性抗体，通过包被底物、竞争结合或夹心法检测反应体系中琥珀酰化水平的降低程度，间接反映酶活性，操作简便、重复性好，适合常规批量样品检测。
5. 蛋白质印迹法（Western Blot）
利用抗琥珀酰化赖氨酸抗体对反应前后底物蛋白的修饰水平进行半定量分析，可用于细胞或组织样品中整体琥珀酰化水平的评估，辅助验证去琥珀酰化酶的功能变化。
6. 耦联NAD+消耗检测法
针对sirtuin家族NAD+依赖的去琥珀酰化反应，通过检测反应体系中NAD+的消耗或烟酰胺的生成速率表征酶活性，可采用紫外法、荧光法或耦联酶反应体系实现，适用于机制研究与化合物评价。
检测仪器
去琥珀酰化酶活性检测依托完善的仪器分析平台，主要涉及以下设备：
- 多功能荧光/化学发光酶标仪：用于荧光底物法、ELISA法的高通量读数；
- 高效液相色谱仪（HPLC）：用于底物与产物的分离定量；
- 三重四极杆液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：用于修饰位点的精确定性与定量分析；
- 紫外-可见分光光度计：用于NAD+消耗检测与蛋白浓度测定；
- 化学发光凝胶成像系统：用于Western Blot检测结果的可视化与定量分析；
- 高速冷冻离心机与超速离心机：用于样品前处理与亚细胞组分分离；
- 超声波细胞破碎仪与组织均质仪：用于组织与细胞样品的破碎处理；
- 蛋白纯化系统（FPLC）：用于重组酶样品的制备与纯度分析；
- 恒温孵育器、梯度PCR仪与自动化移液工作站：保障酶促反应温度、时间与加样体积的精确控制。
应用领域
去琥珀酰化酶活性检测的应用范围广泛，主要涵盖以下领域：
- 药物研发与筛选：评价候选小分子对去琥珀酰化酶的抑制或激活活性，支持先导化合物优化与构效关系研究；
- 肿瘤研究：探讨去琥珀酰化酶在肿瘤细胞代谢重编程、增殖与转移中的作用，寻找潜在干预靶点；
- 代谢性疾病研究：研究酶活性与糖脂代谢、胰岛素抵抗、脂肪酸氧化等过程的关联；
- 心血管研究：评估心肌缺血、心力衰竭等模型中去琥珀酰化活性的变化及其对线粒体功能的影响；
- 神经科学研究：分析神经退行性疾病模型中蛋白质琥珀酰化稳态的失调机制；
- 衰老与应激研究：考察氧化应激、热量限制等条件下酶活性的动态变化规律；
- 生物制品质量控制：为重组酶试剂、生物催化产品的活性放行提供检测依据；
- 基础生命科学研究：系统解析蛋白质琥珀酰化修饰网络及其生理功能。
常见问题
问题一：去琥珀酰化酶活性检测的检测周期是多久？
去琥珀酰化酶活性检测的周期一般为7-15个工作日。实际交付时间会受到多种因素的影响，包括检测项目的数量与复杂程度、样品数量、所选检测方法（如荧光法通常较快，而LC-MS/MS分析涉及的数据处理相对耗时）、样品前处理的难易程度，以及是否需要安排加急处理等。如果实验涉及方法学开发、多批次重复验证或后续的数据深加工，周期可能会适当延长。建议在送样前与检测团队充分沟通实验方案，以便合理安排时间计划。
问题二：去琥珀酰化酶活性检测的检测价格是多少？
去琥珀酰化酶活性检测的价格受多方面因素综合影响，主要包括：所选检测项目的种类与数量、采用的检测方法（常规荧光法与质谱分析等复杂手段的成本投入不同）、样品数量与类型、是否需要额外的样品前处理或方法学优化、检测周期要求（常规周期与加急服务费用存在差异），以及是否需要重复实验与详细的数据分析等。不同研究需求的实验设计差异较大，具体费用需要结合实际检测方案进行评估，欢迎联系我们的技术支持人员沟通检测需求，获取针对性的报价方案。
问题三：去琥珀酰化酶活性检测测试需要什么资质？
我们旗下拥有CMA和CNAS资质，检测能力范围覆盖蛋白质类样品的酶活性分析、色谱与质谱分析等多个领域，能够为科研院所、高校及企业提供规范可靠的检测服务。同时，我们组建了由经验丰富的技术专家构成的专业团队，成员具备扎实的蛋白质修饰研究与酶学分析背景，并配备高精度荧光检测、色谱分离及质谱分析等先进仪器设备，从样品接收、实验操作到数据审核均执行严格的质量控制流程，确保检测结果的科学性、准确性与可追溯性。
问题四：去琥珀酰化酶活性检测的样品应如何保存与运输？
一般建议将蛋白类样品分装为若干小份，避免反复冻融导致酶活性损失，置于-80℃冰箱保存，并采用干冰冷链运输；细胞样品可先收集冻存后干冰寄送；组织样品建议速冻后低温运输。送样时请注明样品名称、蛋白浓度、缓冲液成分及保存条件等信息，以便实验室优化前处理流程，最大程度保障酶活性不受影响，确保检测数据真实反映样品状态。
问题五：如何选择合适的去琥珀酰化酶活性检测方法？
方法选择主要取决于研究目的与样品情况。若需要进行大批量样品筛选或抑制剂评价，推荐选择灵敏度与通量较高的荧光底物法；若关注底物特异性或需要避免偶联反应的干扰，可选用HPLC法；若需要精确鉴定修饰位点或分析复杂内源性样品，LC-MS/MS法更为适合；若仅需评估细胞或组织整体琥珀酰化水平的变化，可考虑Western Blot或ELISA方法。技术团队会根据您的实验目的、样品类型与预算，为您推荐最合适的检测方案。
问题六：去琥珀酰化酶活性检测对样品用量有什么要求？
样品用量因检测方法不同而有所差异。荧光法灵敏度较高，所需蛋白量相对较少；HPLC与质谱分析所需样品量依据底物设计与分析复杂度确定；细胞或组织水平的检测则与样品中酶的表达丰度密切相关。通常建议客户在送样前与技术团队充分沟通，明确最低送样量与样品浓度要求，必要时可先安排预实验进行评估，避免因样品不足或浓度不合适而影响实验进度与结果质量。
问题七：检测完成后可以获得哪些实验数据与技术支持？
检测完成后，客户可获得完整的实验结果资料，包括原始检测数据、酶活性计算结果、标准曲线、动力学参数（如涉及）、图谱信息以及实验方法说明等内容。针对结果解读、数据分析方法以及后续实验方案设计等问题，我们的技术团队也会提供专业的解答与支持，协助客户高效推进科研项目或产品开发进程，实现检测价值的最大化。
