有关物质耐用性试验_CMA/CNAS资质，中析研究所官网|检测中心

技术概述

有关物质耐用性试验是药物分析方法验证体系中的重要组成部分，属于分析方法生命周期管理的关键环节。所谓有关物质，是指药品中存在的原料药降解产物、合成副产物、起始物料、中间体以及制剂工艺过程中产生的杂质等非主成分物质。耐用性试验（又称稳健性试验）的目的是考察分析方法在故意改变某些试验条件时，检测结果不受影响并能够承受一定程度变动的能力，从而证明该方法在日常检验中的可靠性与适用性。

按照《中国药典》通则9101“分析方法验证指导原则”以及人用药品注册技术国际协调会（ICH）Q2指导原则的要求，耐用性试验是色谱类有关物质方法在开发阶段即应开展的研究内容。试验通过系统性地改变流动相比例、流动相pH值、流速、柱温、检测波长、色谱柱品牌或批号、进样体积等关键参数，观察系统适用性指标与测定结果的变化情况。若方法在参数微小波动下依然能够满足分离度、理论板数、拖尾因子等要求，杂质含量测定结果保持稳定，则认为该方法具备良好的耐用性，适合在常规实验室条件下长期使用。

耐用性试验的价值不仅体现在方法验证资料中，更能为日常检验建立可操作的系统适用性范围。通过耐用性研究确定的参数允许波动范围，可直接写入质量标准或检验操作规程，指导检验人员在遇到柱效下降、保留时间漂移等情况时进行科学判断，降低方法失败与结果误判的风险。

检测样品

有关物质耐用性试验的检测对象主要覆盖药品研发与生产链条中的各类样品类型，常见送检样品包括：

原料药：化学合成或提取获得的活性药物成分，包括起始物料、中间体及精制成品；
各种剂型制剂：片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂、口服溶液、软膏剂、乳膏剂等固体制剂与液体制剂；
仿制药与一致性评价样品：仿制药开发过程中的处方工艺样品及注册申报批次样品；
稳定性研究样品：影响因素试验、加速试验与长期试验条件下放置的考察样品；
杂质对照品与标准物质：已知杂质对照物、杂质混合溶液，用于方法分离能力确认；
工艺变更样品：变更合成路线、处方或生产工艺后需要重新评估的样品。

送检时建议同时提供样品的基本信息，如药品名称、规格、批号、包装情况、储存条件以及已有的分析方法或质量标准，以便实验室针对具体品种设计合理的耐用性试验方案。

检测项目

有关物质耐用性试验围绕色谱方法的关键参数展开，通过单因素或多因素设计考察下列条件变化对测定结果的影响：

流动相组成变化：有机相与水相比例的微小调整，评估比例波动对色谱行为的影响；
流动相pH值变化：缓冲盐溶液pH值在设定值附近的偏移，评估pH波动对色谱峰分离与保留行为的影响；
流速变化：考察流速增减对保留时间、分离度及杂质检出结果的影响；
柱温变化：色谱柱柱温箱温度的升高或降低对选择性与分离效果的影响；
检测波长变化：检测波长在最大吸收附近的小幅偏移对灵敏度与杂质定量的影响；
色谱柱替换：不同品牌、不同批号同类型色谱柱之间的耐用性比较；
仪器差异：不同型号高效液相色谱仪之间的方法转移与耐用性评估；
梯度程序变化：梯度斜率、柱平衡时间等因素的波动影响。

在上述每一变动条件下，均需对系统适用性指标与测定结果进行评价，重点关注的检测项目包括：各杂质峰与主成分峰之间的分离度、色谱峰拖尾因子、理论板数、保留时间重复性、杂质检出个数、单个杂质含量与总杂质含量，以及杂质相对保留时间的恒定性等。

检测方法

有关物质耐用性试验通常基于高效液相色谱法（HPLC）开展，整体流程包括方案设计、试验实施与结果评价三个阶段。

方案设计阶段，实验室依据已建立或拟验证的有关物质分析方法，梳理可能影响测定结果的色谱参数，采用单因素试验法逐一改变单一条件，或采用正交设计、析因设计等多因素方法同时考察多个参数的组合效应。每种条件通常设定正常值与上下两个变动水平，形成完整的试验矩阵。

试验实施阶段，在每一变动条件下制备系统适用性溶液、供试品溶液与对照溶液，按照方法规定进样分析，记录色谱图、保留时间、峰面积及响应值等原始数据。同时取同一批供试品在正常条件与各变动条件下分别测定杂质谱，比较杂质检出个数与定量结果。

结果评价阶段，将各变动条件下的数据与正常条件结果进行比对：若各条件下主峰与相邻杂质峰的分离度、拖尾因子、理论板数均符合方法要求，杂质含量结果的相对偏差处于可接受范围内，杂质相对保留时间无显著漂移，则判定方法耐用性良好；若某一条件导致分离度下降或结果超限，则说明方法对该参数敏感，应对该方法参数在质量标准中做出严格规定，必要时优化色谱条件，或将允许波动范围写入操作规程加以控制。

检测仪器

开展有关物质耐用性试验需要依赖一系列精密分析仪器与辅助设备，主要包括：

高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外检测器、二极管阵列检测器（DAD）或蒸发光散射检测器等，是有关物质测定的核心设备；
超高效液相色谱仪（UPLC/UHPLC）：用于小粒径填料色谱柱与快速分析方法开发；
液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）：在需要杂质结构鉴定与确证时使用；
多种规格与型号的色谱柱：C18、C8、苯基柱以及不同品牌、不同批号同类型色谱柱，用于柱间耐用性考察；
电子分析天平：用于对照品与供试品的精密称量；
pH计：用于流动相缓冲液pH值的准确调节与核对；
超声波清洗器与溶剂过滤装置：用于样品溶解提取与流动相的脱气、滤过处理；
柱温箱与自动进样器：用于温度参数变化考察及批量样品的自动化进样；
色谱工作站软件：用于数据采集、积分处理与结果比对。

所有仪器均需处于良好的运行与维护状态，通过定期校准与期间核查，确保耐用性试验数据的准确性与可追溯性。

应用领域

有关物质耐用性试验在医药研发、生产质量控制与注册申报等领域具有广泛的应用价值：

创新药与仿制药研发：在方法开发阶段确认色谱方法稳健可靠，为质量研究提供可靠的分析手段；
药品注册申报：作为方法验证资料的重要组成部分，支撑药学申报资料的完整性；
药品生产企业质量控制：为日常放行检验与稳定性考察提供耐用可靠的标准检验方法；
方法转移与实验室间比对：当检验方法在研发部门与生产实验室之间转移，或委托第三方检测时，耐用性数据可用于评估方法在不同环境中的适用性；
药典方法与进口药品标准复核：复核检验中对法定方法进行耐用性确认，保证方法在不同实验室条件下重现；
工艺变更前后质量对比：评估工艺调整后杂质谱变化，确认原方法是否仍然适用；
稳定性研究：在长期放置试验中持续监控杂质增长趋势，为有效期制定提供依据。

常见问题

问题一：有关物质耐用性试验的检测周期是多久？

有关物质耐用性试验的检测周期一般为7-15个工作日。具体时长受多种因素影响：首先，考察参数的数量直接影响试验工作量，若仅考察流速、柱温等少数参数，周期相对较短，若需全面考察流动相比例、pH值、波长、色谱柱品牌等多个因素及多水平组合，则需要更长的分析时间；其次，样品数量与批次数量越多，平行试验的工作量越大；再次，方法本身的复杂程度也是重要因素，梯度洗脱方法、复杂杂质谱样品或需要多品牌色谱柱比较的项目耗时较长；此外，若在试验中发现方法耐用性存在问题，需要进一步优化并重新验证，周期将相应延长。如有时间紧迫的项目需求，可与实验室沟通加急安排，以便合理规划研发与申报进度。

问题二：有关物质耐用性试验的检测价格是多少？

有关物质耐用性试验的检测费用受多方面因素综合影响，无法一概而论。主要影响因素包括：考察的色谱参数种类与数量，单一参数的验证与多参数全面考察所需的工作量差异较大；检测方法的复杂程度，等度洗脱与梯度洗脱、常规紫外检测与质谱联用分析的成本不同；供试品数量、色谱柱等耗材的使用情况、所需对照品的品类；检测周期要求，常规安排与加急服务的费用结构也存在区别。此外，样品前处理的难易程度、杂质谱的复杂情况以及是否需要出具详细的方法验证报告等，都会对整体费用产生影响。建议在送检前与检测机构充分沟通试验需求与样品情况，获取针对性的报价方案。

问题三：什么是有关物质耐用性试验？为什么必须开展？

有关物质耐用性试验是考察分析方法在故意改变试验条件时保持测定结果稳定能力的验证项目。开展该试验的意义在于：日常检验环境中，流动相配制偏差、柱温波动、色谱柱批次差异等微小变化难以完全避免，若方法对参数变动过于敏感，将导致不同实验室、不同时间得到不一致的结果。通过耐用性试验可提前识别方法的薄弱环节，确定参数允许波动范围，保证方法在常规条件下长期稳定运行，是方法验证资料中不可缺少的内容。

问题四：耐用性试验通常需要考察哪些参数的变化范围？

常见的考察参数包括：流动相有机相比例的微小浮动、缓冲盐pH值的小幅偏移、流速的增减、柱温的升降、检测波长的小偏移以及不同品牌或批号色谱柱的替换等。变化幅度一般依据方法开发时的实际经验确定，通常选择接近日常操作中可能出现的自然波动，例如流速上下浮动一定比例、柱温上下浮动数摄氏度等。每个参数设定正常值与上下变动水平，逐一或组合考察其对系统适用性与杂质测定结果的影响。

问题五：如果耐用性试验结果不合格，应该如何处理？

当某一参数变动导致杂质峰与主峰分离度不达标、色谱峰严重变形或杂质含量结果出现显著偏差时，可采取以下措施：一是优化色谱条件，如调整流动相比例、更换色谱柱类型或修改梯度程序，重新开发更稳健的方法；二是收紧质量标准中对该敏感参数的规定，明确流动相配制、柱温控制等操作允差，减少日常波动带来的影响；三是将耐用性考察中确定的关键控制点写入检验操作规程，加强对检验人员的培训。处理后需重新开展相关验证，确保最终方法满足要求。

问题六：有关物质耐用性试验与精密度、准确度验证有什么区别？

精密度验证考察的是同一条件下重复测定结果之间的接近程度，包括重复性、中间精密度与重现性；准确度验证考察测定结果与真实值或参比值之间的接近程度；而耐用性试验考察的是方法条件发生微小变动时结果的稳定程度。三者关注的角度不同、互为补充，共同构成完整的方法验证体系。简单来说，精密度回答“重复做是否一致”，准确度回答“测得是否准确”，耐用性回答“条件稍微变化是否仍然可靠”。

问题七：送检有关物质耐用性试验时需要提供哪些资料？

为保证试验顺利开展，建议客户提供：拟验证的完整分析方法或质量标准，包括色谱条件、溶液配制方法与系统适用性要求；样品的基本信息，如名称、批号、规格、数量与储存条件；如有，可提供杂质谱研究资料、已知杂质对照品及各杂质限度要求；此外，说明需要考察的具体参数范围与评价标准，有助于实验室据此制定个性化的试验方案，确保验证结论满足研发或申报的实际需求。