志贺氏菌测定_CMA/CNAS资质，中析研究所官网|检测中心

技术概述

志贺氏菌属是一类革兰氏阴性杆菌，是引起细菌性痢疾（简称菌痢）的主要病原菌，主要通过粪-口途径传播，污染食品和饮用水后可引发急性肠道传染病。志贺氏菌属包括痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌四个群，其中福氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌在我国较为常见。人类对志贺氏菌普遍易感，摄入极少量活菌即可发病，临床表现为发热、腹痛、腹泻、里急后重以及黏液脓血便等症状，严重时可危及儿童和老年人的生命健康。

志贺氏菌测定是指运用微生物培养、生化鉴定、血清学分型以及分子生物学等技术手段，对食品、饮用水、环境样品或临床标本中的志贺氏菌进行定性或定量检测的过程。由于志贺氏菌在外界环境中存活能力较强，在食品加工、储运、销售等多个环节均可能造成污染，因此对食品和水源开展志贺氏菌测定，是保障食品安全、预防食源性疾病暴发的重要技术手段。我国食品安全国家标准中明确将志贺氏菌列为部分食品的致病菌检验项目，相关检测工作具有严格的规范和技术要求。

志贺氏菌测定的核心目标包括三个层面：一是判定样品中是否存在志贺氏菌；二是对检出的菌株进行生化确认和血清学分型，明确其所属的菌群和血清型；三是结合流行病学调查，为疾病溯源和污染环节分析提供科学依据。随着检测技术的不断进步，志贺氏菌测定已从传统的培养鉴定方法逐步发展为培养法与快速分子检测方法相结合的综合检测体系，检测效率和准确性显著提升。

检测样品

志贺氏菌测定的适用样品范围广泛，涵盖食品、水质、环境和临床等多个领域，常见样品类型包括：

肉与肉制品：生鲜肉、冷却肉、冷冻肉、熟肉制品、腌腊肉制品等；
乳与乳制品：生鲜乳、巴氏杀菌乳、发酵乳、乳粉、奶油、奶酪等；
水果、蔬菜及其制品：即食果蔬、鲜切蔬菜、蔬菜沙拉、果蔬制品等；
水产品及其制品：淡水鱼、海水鱼、贝类、甲壳类以及各类水产制品；
即食食品：盒饭、凉拌菜、糕点、汉堡、寿司等直接入口食品；
饮用水及包装饮用水：桶装水、瓶装水、管网末梢水、二次供水等；
环境样品：食品加工台面、器具表面涂抹物、从业人员手部涂抹物、下水道水样等；
临床标本：粪便、肛拭子等，用于细菌性痢疾的病原学诊断。

样品采集时应遵循无菌操作原则，使用无菌容器盛装，冷藏条件下尽快送检，避免样品在运输过程中因温度变化或时间延误导致目标菌死亡或杂菌过度繁殖，影响检测结果的准确性。

检测项目

志贺氏菌测定的主要检测项目包括以下几个方面：

志贺氏菌定性检测：判定样品中是否检出志贺氏菌，结果以“检出”或“未检出”表示，并注明取样量和检测量；
生化鉴定：对可疑菌落进行三糖铁试验、葡萄糖铵利用试验、赖氨酸脱羧酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验、水杨苷发酵试验、七叶苷水解试验、靛基质试验、硫化氢试验等一系列生化反应确认；
血清学分型：采用志贺氏菌多价诊断血清及各群因子血清进行凝集试验，确定菌株所属的群别和血清型；
菌落计数：必要时对样品中志贺氏菌进行定量检测，评估污染程度；
药敏试验：对检出的志贺氏菌进行药物敏感性分析，为临床治疗和耐药性监测提供参考；
分子分型与溯源分析：通过脉冲场凝胶电泳等分子分型技术对菌株进行同源性分析，服务于暴发疫情的调查。

检测方法

目前志贺氏菌测定主要采用以下几类方法，各有特点和适用场景：

一、传统培养鉴定法。这是志贺氏菌测定的标准方法，也是仲裁性方法，其基本流程为：样品经无菌操作称取后，接入志贺氏菌增菌液中先行增菌培养，使受损或数量较少的目标菌得以恢复和繁殖；增菌液培养后划线接种于麦康凯琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD）或HE琼脂等选择性培养基上进行分离培养；挑取可疑菌落接种三糖铁琼脂斜面和营养琼脂，观察初步生化反应；再通过系列生化试验进行确认，最后用诊断血清做玻片凝集试验完成血清学分型。该方法准确可靠、结果直观，但检测周期较长，一般需要数天至一周以上才能出具最终结论。

二、聚合酶链式反应（PCR）法。针对志贺氏菌的特异性基因片段（如侵袭性质粒抗原基因ipaH等）设计引物和探针，通过核酸扩增技术实现目标菌的快速检测。PCR方法灵敏度高、特异性强，可在增菌后数小时内获得结果，特别适用于应急检测和大规模样品的初筛。实时荧光定量PCR还可实现定量分析，进一步满足风险评估的需求。

三、酶联免疫吸附法（ELISA）。利用志贺氏菌特异性抗体与样品中目标菌抗原的免疫反应进行检测，操作相对简便，可实现批量样品的快速筛查，常作为培养法的辅助手段使用。

四、全自动微生物鉴定系统法。对分离获得的纯培养物，可采用全自动生化鉴定系统进行快速鉴定，系统通过数据库比对自动给出鉴定结果，显著提高了生化鉴定的效率和标准化程度。

实际检测中，通常以国家标准方法为基础，根据样品性质、检测目的和时效要求选择单一方法或组合方案，确保结果的科学性和可靠性。

检测仪器

志贺氏菌测定涉及的实验室仪器设备种类较多，主要包括：

恒温培养箱：用于增菌培养、分离培养及生化试验的恒温孵育；
生物安全柜：为样品处理、接种、划线等操作提供无菌且安全的操作环境；
高压蒸汽灭菌器：用于培养基、试剂及实验器材的灭菌处理；
均质器与拍击式均质仪：用于样品的充分均质和微生物的洗脱；
光学显微镜：用于菌体形态观察和革兰氏染色镜检；
PCR扩增仪与实时荧光定量PCR仪：用于分子生物学检测的核酸扩增；
电泳系统与凝胶成像分析系统：用于扩增产物的分离和结果观察；
全自动微生物鉴定系统：用于可疑菌株的快速生化鉴定；
酶标仪与洗板机：用于ELISA方法的光度测定；
离心机、振荡器、恒温水浴锅：用于样品前处理和试剂温育；
微量移液器、电子天平、pH计：用于试剂配制和加样操作。

上述仪器设备需定期校准和维护，实验室应建立完善的质量控制体系，包括培养基的灵敏度验证、阳性和阴性对照菌株的设置等，以保证检测过程始终处于受控状态。

应用领域

志贺氏菌测定在多个领域发挥着重要作用：

食品安全监管：用于食品生产企业出厂检验、市场抽检、进出口食品检验等环节，防止带菌食品流入市场；
饮用水卫生监测：对生活饮用水、桶装水、二次供水等进行定期检测，防范水源性痢疾暴发；
餐饮行业卫生控制：对学校食堂、集体供餐单位、餐饮门店的食品和餐具进行监测，降低群体性食物中毒风险；
临床病原学诊断：对腹泻病人的粪便标本进行检测，明确病因，指导临床合理用药；
突发公共卫生事件处置：在菌痢暴发疫情中，对可疑食品、水源和环境样本开展检测，为流行病学调查和疫情溯源提供实验室证据；
食品加工企业质量控制：作为HACCP体系验证和环境监控的一部分，评估生产环境的卫生状况，指导清洁消毒措施的改进。

常见问题

问题一：志贺氏菌测定的检测周期是多久？

志贺氏菌测定的检测周期一般为7-15个工作日。具体时间受多方面因素影响：首先，检测项目数量越多，涉及的增菌、分离、生化鉴定和血清学分型等环节越复杂，所需时间相应延长；其次，样品数量较多时，实验室需要分批处理，出报告的周期会有所增加；再次，所选检测方法的复杂程度也直接影响周期，例如传统培养鉴定法需要经过增菌、分离、生化确认和血清学试验等多个阶段，耗时较长，而PCR等快速方法可在较短时间内获得初筛结果，但阳性结果仍需培养法确认；此外，若个别样品出现可疑菌落需要重复验证，或在原始鉴定基础上增加菌落计数、药敏试验等附加项目，检测周期也会相应顺延。如果客户有加急需求，可与实验室沟通安排优先处理，在保证结果准确的前提下尽量缩短报告出具时间。

问题二：志贺氏菌测定的检测价格是多少？

志贺氏菌测定的检测费用受多种因素综合影响，无法一概而论。主要影响价格的因素包括：检测项目的范围和数量，例如仅做定性检测与同时进行血清分型、菌落计数、药敏试验等组合项目的费用会有明显差异；所选用的检测方法，传统培养法与PCR等分子生物学方法的技术成本不同，报价也相应不同；样品的数量和类型，批量送检、特殊基质样品的前处理难度都会影响整体费用；检测周期要求，加急服务通常会产生额外的费用；此外，报告用途、是否需要附加技术说明等也会对费用产生影响。建议有检测需求的客户提前与检测机构沟通检测方案，提供样品信息和具体要求，由专业人员评估后获取准确的报价。

问题三：志贺氏菌测定依据的主要方法标准有哪些？

志贺氏菌测定通常依据食品安全国家标准中食品微生物学检验志贺氏菌检验的相关方法执行，该标准规定了增菌、分离、生化鉴定和血清学分型的完整技术流程。此外，针对不同样品类型，还可参照饮用水卫生标准中的微生物检验方法、进出口食品微生物检验标准以及临床检验操作规范等开展检测。实验室会根据样品性质和客户的具体用途，选择适用的标准方法，并在报告中注明所依据的方法依据，确保检测过程的规范性和结果的可比性。

问题四：志贺氏菌有哪些主要的群和血清型？

志贺氏菌属根据生化反应和抗原构造的差异分为四个群：A群即痢疾志贺氏菌，B群即福氏志贺氏菌，C群即鲍氏志贺氏菌，D群即宋内氏志贺氏菌。每个群内又包含多个血清型和亚型，如福氏志贺氏菌包含多个常见的血清型别。在我国，细菌性痢疾的病原菌以福氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌为主，其中福氏志贺氏菌占比历来较高。检测中，对检出的菌株进行血清学分型不仅有助于明确病原学诊断，还可以为暴发疫情的溯源和流行病学分析提供重要的分型信息。

问题五：样品采集和运输过程中需要注意什么？

志贺氏菌测定的样品采集和运输需要严格遵循无菌操作规范。采样应使用无菌器具和无菌容器，避免交叉污染；液体样品应充分混匀后取样，固体样品应从不同部位多点采集以保证代表性；样品采集后应尽快冷藏运送，在规定时限内送达实验室，切勿冷冻保存，因为志贺氏菌对低温和冷冻较为敏感，冷冻可能导致活菌死亡而出现假阴性结果；运输过程中应防止样品泄漏和温度失控。临床粪便标本宜在发病早期、使用抗菌药物之前采集，且应优先挑取脓血黏液部分送检，以提高检出率。

问题六：PCR快速检测方法与传统培养法各有什么特点？

传统培养法的优点是结果直观可靠，能够获得活菌并进行后续的生化鉴定、血清分型和药敏试验，是公认的确认性方法，缺点是检测周期较长、操作步骤多。PCR快速检测方法的优点是灵敏度高、特异性好、出结果快，通常在增菌培养后数小时内即可完成检测，特别适合应急筛查和大批量样品的初筛，但PCR检测的是核酸片段，不能直接区分活菌与死菌，阳性结果一般仍需结合培养分离进行确证。实际工作中，两种方法常常互为补充：以PCR方法快速筛查，再用培养法确认和进一步分型，兼顾检测时效性和结果可靠性。

问题七：志贺氏菌测定的结果报告应如何解读？

志贺氏菌定性测定的结果通常以“检出”或“未检出”报告，并注明检测所用的样品量和稀释倍数等信息。“未检出”表示在规定取样量和检验条件下未发现目标菌，不代表样品绝对无菌，仅说明目标菌含量低于方法的检出限。“检出”则表明样品中存在志贺氏菌，需要引起高度重视，相关食品或水源应停止使用或销售，并追溯污染来源。对于检出的菌株，报告还可能包含生化鉴定结果和血清学分型信息。委托方在拿到报告后，应结合样品来源、执行标准和用途等综合判断结果的合规性，必要时可向检测机构的技术人员咨询，获取专业解读和后续处理建议。